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En octubre de 1469 se casaron, en Valladolid, Isabel de Castilla y Fernando de Aragón. Este matrimonio no supuso la unión de los dos reinos, únicamente quedaron unidos en las personas de los reyes.
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Isabel de Castilla y Fernando de Aragón influyeron en la política de Europa y neutralizaron la supremacía francesa a partir de alianzas con otros reinos europeos, casando a sus hijos.
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Juana, la segunda hija de los RR.CC, nació el año 1479. Desde siempre, se caracterizó por su carácter erudito, apasionada de las lenguas y la música, que a los dieciséis contrajo matrimonio con Felipe el Hermoso.
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La joven parte para Flandes y se enamora de Felipe. La boda se celebró el 18 de octubre de 1496, y a partir de allí residió en Gante y Bruselas, donde sufrió dificultades para adaptarse a la corte flamenca.
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El 25 de febrero de 1500 nació su primer hijo varón, que recibió el nombre de Carlos, quien sería duque de Luxemburgo y heredero del trono. Antes habían nacido sus hijos Leonor, Isabel, Fernando, María y Catalina.
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Tras la muerte de los herederos de Castilla y Aragón, Juana y Felipe vienen a la península, en 1501, para ser reconocidos como herederos. Son recibidos por los RR.CC, en Toledo, donde en las Cortes de Castilla del 1502, juran como herederos de la corona a Juana y Felipe.
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Felipe el Hermoso regresa a Flandes, al no adaptarse a las costumbres castellanas. Juana ante la insistencia de la reina Isabel, se queda en Castilla, muy disgustada al separarse de su esposo, que regresará en 1504, a Flandes, tras un enfrentamiento con su madre, en el castillo de la Mota.
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El 25 de noviembre de 1504 muere la reina Isabel. En su testamento nombra como heredera a Juana, sin embargo, en caso de no poder gobernar la regencia sería para su padre, Fernando. En 1505, con las Cortes de Toro, Fernando se convierte en el Regente de Castilla.
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Juana y Felipe no se conformaron con lo acordado en las Cortes de Toro, por lo que fueron a España en 1506, porque Felipe deseaba la regencia, y con apoyos de nobles castellanos lo consigue. Finalmente, Fernando se retira a Aragón con Germana de Foix.
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Felipe I de Castilla fallece en Burgos, el 25 de septiembre de 1506. Tras su muerte, se forma un consejo de regencia presidido por el Cardenal Cisneros, quien reclama la vuelta de Fernando, que acababa siendo regente de 1507 a 1516.
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El 15 de febrero de 1509, la reina Juana fue trasladada, junto a su hija Catalina, a Tordesillas (Valladolid). Donde residió 46 años bajo la custodia de los marqueses de Denia.
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Deja como herederos de sus estados a su nieto Carlos.
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Los comuneros reclaman a Juana como legítima soberana de Castilla.
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Juana I de Castilla muere en Tordesillas.