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Se casaron, en Valladolid, Isabel de Castilla y Fernando de Aragón. Este matrimonio no supuso la unión de los dos reinos, únicamente quedaron unidos en las personas de los reyes.
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Influyeron en la política de Europa, neutralizando la supremacía de Francia. Por medio de los enlaces matrimoniales de sus hijos estableciendo alianzas con Inglaterra, Países Bajos, Austria y Portugal.
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La segunda hija de los RR.CC., Juana, nacida en 1479. A los dieciséis años, sus padres la desposaron con Felipe el Hermoso, de dieciocho años.
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La boda se celebró el 18 de octubre de 1496, y desde entonces residieron en Gante y Bruselas. Juana encontró dificultades para adaptarse al nuevo país y a las costumbres de la corte flamenca.
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El 25 de febrero de 1500 nació su primer hijo varón, a quien se le dio el nombre de Carlos, con el título de duque de Luxemburgo como heredero del trono.
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Juana I y Felipe vienen a la Península, en 1501, para ser reconocidos como tales. Son recibidos por los RR.CC. en Toledo, donde, reunidas las Cortes de Castilla el 22 de mayo de 1502, juraron como heredera de la corona a Juana y como consorte al archiduque Felipe;
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El 25 de noviembre de 1504 muere la reina Isabel. Las Cortes, reunidas en Toro (1505), juraron a Fernando como regente del reino de Castilla
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Juana, ante la insistencia de la reina Isabel, se queda en Castilla, muy disgustada por separarse de su esposo. Esta separación durará hasta 1504 en que Juana, desoyendo los consejos de su madre, se embarca para Flandes.
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Felipe murió en Burgos el 25 de septiembre de ese mismo año.
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Juana y Felipe, no conformes con lo acordado en las Cortes de Toro, vienen a España en abril de 1506. Felipe desea la regencia y, apoyándose en la alta nobleza castellana, lo consigue (Tratado de Villafáfila)
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El 15 de febrero de 1509, la reina Juana fue trasladada, con su hija Catalina, a Tordesillas (Valladolid).
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Al morir Fernando el Católico, en 1516, deja heredero de sus estados patrimoniales a su nieto Carlos, primogénito de Juana y Felipe, heredero también de la corona de Castilla.
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Las Comunidades de Castilla al absolutismo monárquico de Carlos I (1520-22), la figura de la reina vuelve a adquirir importancia, al apoyarse los comuneros en Juana
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Juana de Castilla muere el día 12 de abril de 1555 en Tordesillas (Valladolid).