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Este matrimonio no supuso la unión de los dos reinos, únicamente quedaron unidos en las personas de los reyes.
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Segunda hija de los RR.CC.
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A los 16 años, sus padres la desposaron con Felipe el Hermoso, de 18 años en Flandes. A pesar de que no se conocían, se sintieron atraídos desde el primer momento. Tras la boda, residieron en Gante y Bruselas, donde Juana encontró dificultades para adaptarse.
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Se le dio el título de duque de Luxemburgo como heredero del trono. Antes había nacido Leonor (1498) y después Isabel (1501), Fernando (1503), María (1505) y la hija póstuma de su marido, Catalina (1507).
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Son recibidos por los RR.CC. en Toledo.
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Al morir sucesivamente los herederos de la corona de Castilla y Aragón, juraron a Juana como heredera y como consorte al archiduque Felipe; la misma ceremonia se celebró meses después en Zaragoza.
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El archiduque regresa rápidamente a Flandes y Juana, ante la insistencia de la reina Isabel, se queda en Castilla muy disgustada por separarse de su esposo. Tras un enfrentamiento con su madre en el castillo de la Mota, Juana embarca para Flandes.
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En su testamento nombraba a su hija Juana como heredera y, en caso de no poder gobernar, por enfermedad o ausencia, se encargaría de la regencia D. Fernando.
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Nombrado por Las Cortes en Toro.
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Felipe desea la regencia y, apoyándoselos en la alta nobleza, lo consigue (Tratado de Villafáfila).
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Se formó un consejo de regencia que, presidido por el Cardenal Cisneros, reclamó la vuelta del rey católico.
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Fue trasladada con su hija Catalina y allí vivieron 46 años bajo la custodia de los marqueses de Denia.
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Deja heredero de sus estados patrimoniales a su nieto Carlos, primogénito de Juana y Felipe, heredero también de la corona de Castilla.
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La figura de la reina vuelve a adquirir importancia, al apoyarse los comuneros en Juana por considerarla la legítima soberana de Castilla. Establecen su sede en Tordesillas, pero finalmente serán derrotados.
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Muere en Tordesillas (Valladolid).
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Hijo de Juana.