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Noació en Toledo. Sus padres se llamaban Garcilaso y Sancha.
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Es coronada con el nombre de Juana I. Durante su ausencia en Flandes, queda como regente su padre, Fernando el Católico.
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Fueron a La Coruña para ganar tiempo y poder reunirse con nobles castellanos antes de presentarse ante Fernando.
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Fue firmado por Manuel I y Juana I. Su objeto era precisar definitivamente los límites entre las áreas de influencia de ambos reinos en el norte de África, definidos quince años antes en el Tratado de Tordesillas.
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El rey Carlos piensa unir estos dos océanos mediante un canal que atraviese el istmo de Panamá
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Con ella se pretendía poner fin a la Guerra de la Liga de Cognac. El Emperador Carlos V renunciaba a sus derechos sobre el ducado de Borgoña y otros territorios y Francisco I hacía lo mismo sobre las regiones de Flandes y Artois. Fue firmada por Luisa de Saboya y Margarita de Austria.
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Murió en Niz, asistido por su amigo Francisco de Borja.